哺乳动物蛋白提取试剂盒组成

本试剂盒包含以下成分：5XBuffer 10ml、5XNaCl 10ml、5XSDS 10ml、5XDOC 10ml、5XNP-40 10ml、20XPBS 10ml 及 Protease inhibitor cocktail 0.5ml。该试剂盒可在常温下保存，唯一的例外是 Protease inhibitor cocktail 需在-20°C下保存，保质期可达24个月。

提取步骤

1.准备细胞裂解缓冲液：根据5XBuffer、5XNaCl、5XSDS、5XDOC和5XNP-40按1:1:1:1:1（v/v）配制细胞裂解缓冲液。每1ml的细胞裂解缓冲液可用于提取10⁶至10⁷个细胞或5至20mg的组织。在使用前需加入10μl的Protease inhibitor cocktail。

2.洗涤细胞或组织，进行细胞裂解：

a. 对于贴壁细胞：去除培养基后，用PBS缓冲液冲洗细胞两次，接着加入细胞裂解缓冲液（106~107个cells/ml），将细胞置于冰袋中，摇床孵育30分钟，期间对细胞进行阶段性重悬，最后刮取并收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：将细胞置于700xg下离心5分钟，弃去上清液。使用PBS重悬并洗涤细胞两次，在4°C下离心去除上清液。将细胞沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（106~107个cells/ml），置于冰袋，摇床孵育30分钟。

c. 对于组织样品：将组织切成小块，用PBS冲洗两次。加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样本转移至预冷的微量匀浆器，冰上均质组织30~50次。需要强调的是，均质过程对靶蛋白的功能完整性至关重要。

3.富集蛋白：在4°C下以12,000xg离心10分钟以沉淀细胞碎片，也可进行高速离心100,000xg，离心45分钟以制备蛋白质溶液。

4.将含蛋白质的上清液转移至冷冻管中，在冰上保存可立即使用，或将蛋白质溶液储存于-70°C中以备后用。记住，使用人生就是博-尊龙凯时的高质量试剂盒将大大提升你的实验成功率，为你的生物医疗研究提供充分保障。