在基因功能研究中,siRNA和miRNA被广泛视为强大的工具。siRNA是一类人工合成的双链RNA分子,长度通常为19-23个核苷酸。它通过特异性结合并降解细胞内的目标mRNA,从而实现基因沉默,有效抑制特定基因的表达。而miRNA,即microRNA,是一种机体内源产生的非编码单链RNA分子,长度约为22个核苷酸,它能够通过与mRNA的3'非翻译区(3'UTR)部分互补结合来调控基因表达。
这两种RNA的转染技术在疾病机制探索、药物靶点发现等生物医疗领域发挥着重要的作用。然而,实际操作中,细胞毒性和转染体系等问题常常导致转染效果不理想。那么,如何提高转染效率呢?以下是一些有效的措施:
1. 确保siRNA或miRNA的高纯度
确保siRNA经过PAGE纯化和脱盐处理,高纯度的siRNA或miRNA有助于获得较高的转染效率。
2. 维持细胞良好的状态
细胞状态对转染结果至关重要。一般来说,细胞密度应达到70%-80%才能进行转染,同时应选用代数较短、活力良好的细胞,以减少细胞毒性影响。
3. 避免RNA降解
在整个实验过程中,使用无RNA酶和无热原性的材料,如离心管和缓冲液,以防止RNA的降解。
4. 进行预实验以调整转染试剂与RNA的比例
不同细胞系对转染试剂的耐受度不同,适宜的RNA浓度也有所差异。因此,需通过预实验进行梯度调整,以确保正式实验中具有较高的转染效率。
5. 采用无血清或低血清的培养环境
使用无血清或低血清培养基,以避免转染试剂与RNA的结合受到干扰,进而影响转染效果。
6. 选择合适的转染试剂
不同细胞对转染试剂的敏感度不同,因此可以根据文献或个人经验选择最合适的试剂进行转染。
此外,人生就是博-尊龙凯时推出的一款专门针对siRNA和miRNA转染的体外转染试剂,广泛适用于多种细胞系,能显著提升转染效率。它不仅具备超高的转染效率,还能有效减少细胞毒性,确保细胞的正常生理功能。经过严谨测试,该产品适用于HeLa、MCF-7、HepG2、CHO等贴壁细胞,并对难以转染的悬浮细胞系(如K562或THP-1细胞)及部分原代细胞均表现出优异的沉默效率。
通过使用人生就是博-尊龙凯时的转染试剂,能够从根本上解决转染效率低的问题,帮助您规避可控的风险,进而推进基因研究的进展。