贝博®BBcellProbe®M23线粒体超氧化物染色探针（BB-441153）是一种创新型的细胞渗透荧光染料，旨在选择性标记活细胞中的线粒体。该探针具有弱巯基反应性的氯甲基官能团，能够迅速穿过细胞膜并在活性线粒体内聚集。一旦进入线粒体，探针会被超氧化物快速氧化，产生明亮的绿色荧光。

重要的是，BBcellProbe®M23线粒体超氧化物染色探针专门对超氧化物具有氧化性，而不会受到其他活性氧（ROS）和活性氮（RNS）物质的影响，从而确保了检测的准确性。氧化后的产物与核酸结合后，可以发出大量的绿色荧光，极大地增强了信号强度。

每个试剂盒根据使用需求，可用于30-150个样本或60-300个样本的实验。贝博®BBcellProbe®系列线粒体探针更提供多种颜色选择，以支持多色标记实验，研究者还可以选择红色、蓝色、橙色等多种染色试剂盒，满足不同实验要求。

在检测方法上，推荐使用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜，样本类型涵盖悬浮细胞和贴壁细胞。

染色工作液配制

进行染色之前，需根据样本数量，用探针稀释液将BBcellProbe®M23荧光染料母液进行10倍稀释，并进一步用HBSS缓冲液或相应的培养基进行50-100倍稀释，配制成染色工作液。

细胞染色步骤

对于贴壁细胞

1）在培养皿/培养板中准备细胞样本。

2）待细胞生长至适当密度时，吸去培养液，加入适量37℃预热的染色工作液，避光孵育30至60分钟（具体时间需根据细胞类型优化）。

3）用新鲜培养基替换染色液。

4）使用荧光显微镜（配备适当滤片）或激光共聚焦显微镜观察，最大激发/发射波长为488/510nm。

对于悬浮细胞

1）进行离心并吸去上清。

2）利用37℃预热的染色工作液重悬细胞，在避光条件下孵育30至60分钟（具体时间需根据细胞类型优化）。

3）离心后吸去染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。

4）置于荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪下检测，最大激发/发射波长为510/580nm。

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