酶联免疫吸附试验（ELISA，英文全名：Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种在生物医学领域广泛应用的固相酶免疫测定方法。这项技术不仅可以用于抗原的检测，还可以用于抗体的测定。

ELISA的基本步骤包括：

1. 将已知的抗原或抗体结合到固相载体上，并保持其免疫活性；

2. 测试时，将待检样本与酶标记的抗原或抗体进行反应，按照特定步骤与固相载体表面吸附的抗原或抗体结合；

3. 通过洗涤步骤分离抗原-抗体复合物与游离成分；

4. 添加酶底物，催化反应产生显色，从而进行定量或定性分析。

ELISA检测的目标是为实验提供准确的依据。为确保实验数据的有效性，必须在实验过程中实施全面的质量控制，这包括在样本收集前制定详细计划。

在ELISA试验中，血清和血浆是常见的样本类型，但样本中的干扰物质可能导致假阳性或假阴性结果，因此分为内源性和外源性物质两大类。

内源性物质

研究显示，约40%的人血清样本中可能含有非特异性干扰物，常见的干扰物包括类风湿因子（RF）、补体等。这些物质会影响检测的准确性。

类风湿因子

在血清中，类风湿因子的IgM和IgG可以与ELISA系统中的捕捉抗体和酶标记二抗结合，从而导致假阳性。为解决这一问题，可以采用以下方法：

• 用F(ab)2替代完整的IgG；
• 对样本进行热变性处理；
• 在样本中添加降解剂如2-巯基醇以降解RF。

补体

在ELISA过程中，抗体可能会发生构象变化，暴露出与补体C1q结合的位点，这可能导致假阳性。为避免此类情况，可以通过EDTA稀释样本或加热处理来灭活C1q。

外源性物质

外源性干扰物质多源于样本采集和存储不当，包括样本溶血、细菌污染等。

样本溶血

人为因素引起的样本溶血会释放血红蛋白并产生过氧化物酶活性，干扰ELISA的结果。为避免此情况，采样时应尽量避免造成溶血。

样本污染

细菌污染会导致内源性酶的释放，从而干扰ELISA测定结果。目前，推荐采取严格的样本处理和存储规范，以减少这一风险。

结论

除了考虑试剂和操作因素外，还应从样本因素进行深入分析，以排除干扰，从而为临床提供准确可靠的检测结果。只有在保证样本质量的前提下，才能确保ELISA测试的准确性和有效性。

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