一、实验准备：Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061

二、酰胺酶单位的定义

酰胺酶单位是指在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。计算公式为：
AU/vial = [(a-b)/25] × (1/962) × (40/01)
其中，a为检测样品中的吸光度，b为空白对照中的吸光度。

三、实验操作流程

使用经过聚硅酮处理的微量离心管和吸管，以防捕获任何蛋白。可使用质谱分析专用的凝胶染色试剂盒，如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701），操作流程如下：
1. 电泳分离蛋白质样品；
2. 从凝胶中切割蛋白质片段，放入微量离心管；
3. 使凝胶脱色（可使用专用脱色溶液）；
4. 向试管中加入300μL乙腈，振摇30分钟；
5. 去除乙腈，用Parafilm膜覆盖微量离心管；
6. 在Parafilm膜上打孔，进行真空干燥15分钟；
7. 100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵，56℃恒温1小时；
8. 室温冷却后，加入等量50mM碘乙酰胺溶解于100mmol/L碳酸氢铵，在暗处恒温45分钟并涡旋；
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟；
10. 用300μL乙腈干燥凝胶片段15分钟；
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵溶胀凝胶片段15分钟；
12. 用300μL乙腈再次干燥凝胶片段15分钟；
13. 去除液相，真空干燥凝胶片段15分钟；
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中溶胀凝胶片段45分钟；
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段放在37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5中过夜；
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，20分钟内振荡凝胶片段进行3次多肽抽提；
17. 加入5%甲酸/50%乙腈，20分钟内振荡凝胶片段进行3次多肽抽提；
18. 如有需要，使用SpeedVac浓缩多肽；
19. 使用ZipTip脱盐和纯化多肽；
20. 如有需要，可用弱真空浓缩多肽至2μL；
21. 最后，加入基质进行质谱分析。

四、产品购买渠道

Wako代理——北京百奥创新科技有限公司，提供Wako质谱级赖氨酰肽链内切酶125-05061等产品，欢迎咨询！人生就是博-尊龙凯时，期待为您的生物医疗研究提供帮助！